切片经番红一顾绿双重染色后

作者:admin 来源:未知 点击数: 发布时间:2019年10月24日

  2010年9月河南师范大学学报(自然科学版) Journal HenanNormal University(Natural Science) V01.38 No.5 Sept.2010 文章编号:1000一2367(2010)05—0163--04 潮霉素对拟南芥幼苗真叶形成的影响 (河南师范大学生命科学学院,河南新乡453007)摘要:研究了潮霉素对拟南芥幼苗子叶生长与真叶形成的影响.结果表明,生长于含潮霉素MS培养基上的 拟南芥幼苗与对照相比,子叶非常小,而且没有真叶形成.随培养时间的延长,拟南芥幼苗茎尖分生区细胞越来越不 规则,且萎缩.因此,推测潮霉素可能通过影响蛋白质的合成,从而影响拟南芥幼苗子叶的生长和真叶的发生,继而 影响拟南芥幼苗的生长. 关键词:拟南芥;潮霉素;真叶;茎尖 中图分类号:Q94 文献标志码:A 叶是绿色植物进行光合作用的主要器官,植物通过光合作用合成生长发育所需的碳水化合物,多种糖, 脂肪和蛋白质等有机物[1-3].叶是蒸腾作用的主要器官,通过蒸腾作用,植物不但能实现矿质元素的高效运 输,还可免受过强日光的灼伤“’5].此外,叶还有吸收,分泌等多种功能.叶的发育一般由叶原基上部经顶端 生长,边缘生长和居间生长形成,而叶在生长发育过程中,经常受到各种生长环境的影响’7].因此对叶器官 建成的调控应日益受到人民的关注,本文以野生型拟南芥幼苗为材料,研究了潮霉素对其真叶形成,生长的 影响,以揭示潮霉素抑制幼苗叶生长的机制,同时也可为植物幼苗叶的发育及相关生理生化和分子生物学研 究提供参考. 1材料与方法 1.1材料 野生型拟南芥(哥伦比亚型)种子由本实验室保存. 1.2拟南芥幼苗的培养 将拟南芥种子在无菌水里浸泡30 min后,加入70%乙醇放置30 S,无菌水洗3次,加入10%次氯酸钠 振荡5 min后,无菌水洗5~6次.然后将拟南芥种子重悬于无菌水,用1 mL移液器吸取拟南芥种子播种于 MS固体培养基上,在22/18,16/8 h光周期条件下培养. 1.3潮霉素对拟南芥幼苗生长的影响 将拟南芥种子播种于MS固体培养基(分别含0肛g/mL,10 pg/mL,20/zg/mL,30弘g/mL或50 ttg/mL 潮霉素)上,在z2/18,16/8 h光周期条件下进行培养,每个处理设3个重复.观察不同时间拟南芥幼苗的 生长情况. 1.4石蜡切片分析 将拟南芥种子播种于MS固体培养基(分别含0弘g/mL,30ug/mL潮霉素)上,在22/18,16/8 芥幼苗转移到MS培养基上培养,以研究拟南芥幼苗叶生长的情况.分别取生长于MS培养基和含30 t-tg/mL潮霉素的MS培养基上的拟南芥幼苗茎尖部位(每次取3个 收藕日期:2010—01—10 基金项目:河南省高等学校青年骨干教师资助计划项目;河南省相关项目(0,2009A180009) 作者简介:丁笑生(1976一),男,河南鹿邑人,河南师范大学讲师,主要从事生物技术研究. 通讯作者:段红英,河南师范大学副教授,博士,主要从事植物遗传及分子生物学研究. 万方数据 164 河南师范大学学报(自然科学版) 样本,重复3次),用50%FAA溶液固定,梯度酒精脱水,然后转入二甲苯中并浸蜡,石蜡包埋后,LKB超薄 切片机切片,切片经番红一顾绿双重染色后,在Olympus光学显微镜下观察并拍照. 2结果与分析 2.1 潮霉素对拟南芥幼苗叶生长的影响 将拟南芥种子分别播种于含有 0pg/mL(对照),10 pg/mL,20 pg/ mL,30 ttg/mI。和50 ttg/mL潮霉素 的MS培养基上进行培养.培养5 d时,生长于MS培养基与含潮霉素培 养基上的拟南芥幼卣差异非常明显, 如图1(a)所示,对照拟南芥幼苗的子 瘌b分别代表在Ms培养摹(分别含o ug/mL,10 ug/mL,20 pg/mL。 叶较大,大约0.12 cm宽.培养12 d30 ug/mL,50 ug/mL潮霉素)卜培养5 d帛112 d的拟南芥幼苗. 时,对照拟南芥幼苗有两对真叶(图 图l潮霉素对拟南并幼苗叶生长的影响 1,b),子叶约0.3 cm宽,而生长于含 潮霉素培养基上的拟南芥幼苗没有形成线 cm宽,部分子叶旱现黄绿色,4%褐化死亡,而且仅 生长于含10 og/mL,20 pg/mI。潮霉素培养基上的幼苗子叶部分展开.培养15 d时,对照组拟南芥幼苗第 3对真叶出现,而潮霉素处理的拟南芥幼苗90%枯死.值得注意的是,生长于含潮霉素的MS培养基上的拟 南芥幼苗在整个试验过程中没有形成线潮霉素对拟南芥幼苗茎尖的影响 植物茎尖一般分为分生区,伸长区和成熟区,图2(a,C,e,g,i)表明拟南芥茎尖分生区表面的一至数层细 胞排列规则,表现为垂周分裂,随培养时间的延长,生长于含30/卫g/mL潮霉素培养基上的幼苗茎尖分生区 细胞越来越不规则。且萎缩(图2,b,d,f,h,j).相比较而言,在含30肛g/mI。潮霉素的MS培养基上培养7 d的拟南芥幼苗恢复培养5 d时,茎尖分生区的细胞呈现规则的排列(图2,1),而恢复培养2 d时的分生区细胞 稍微规则(图2,k). 另外,从图2(a,C,e,g,i)可以看出,生长于MS培养基上的拟南芥幼苗在培养过程中有叶原基形成,分 别为1,1,2,3对叶原基.但是生长于含潮霉素培养基上的拟南芥幼苗没有形成叶原基,这与其生长形态一 致,即生长于MS培养基上的拟南芥幼苗有真叶形成,且随培养时间的延长,真叶的数目也相应增加,但是生 长于含潮霉素培养基上的拟南芥幼苗没有形成线讨论拟南芥作为生物学研究领域的模式植物,使研究者能够迅速地证明各种假说,本文以野生型拟南芥为材 料,研究了潮霉素对拟芥南幼苗叶形态结构的影响,以期探索潮霉素对植物生长发育的影响以及其作用机 理.本研究表明,生长于含潮霉素的MS培养基上的拟南芥幼苗子叶几乎不生长,且子叶弯曲,但是生长于 MS培养基上的对照组拟南芥幼苗子叶比较大.尤其在整个实验过程中,生长于含潮霉素培养基上的拟南芥 幼苗没有真叶形成.为进一步研究潮霉素影响拟南芥幼苗真叶形成的机制,利用石蜡切片技术研究了茎尖的 超微结构,结果发现,生长于含潮霉素的MS培养基上的拟南芥幼苗茎尖的分生区细胞萎缩。越来越不规则, 且没有形成叶原基.表明。潮霉素处理引起了拟南芥幼苗茎尖结构萎缩,使真叶不能正常形成.这与其生长形 态一致,即潮霉素处理的拟南芥幼苗没有真叶形成.在植物中,潮霉素通过竞争叶绿体和线粒体中的核糖体 与延长因子EF一2的结合位点,破坏各种细胞中核糖体的功能,从而抑制蛋白的合成,使敏感组织褐化死 亡[89J.推测潮霉素可能抑制了拟南芥幼苗中一些蛋白的合成,使得拟南芥幼苗茎尖的结构萎缩,进而抑制 了真叶的形成. 万方数据 丁笑生等:潮霉素对拟南芥幼苗线 Ez] f,h和J分别代表存含自130Hg/mL潮霉索的MS培养基E培养2 d和12d的茎尖纵切 面图;k和1分别代表和含自30 ug/mL潮霉索的MS培养基卜培养7 d后转移皇0MS培养基卜.培养2 5d的苹尖纵切血l墨I.标尺为20um. 图2潮霉素对拟南芥幼苗攀尖7t-跃的影响 参考文 献Simpson DJ,Lee TH.Plastoglobules leafchloroplasts twocuhivars Capsicumannuum EJ3.Cytobios。1976,15(58/59):139一 147. Zhang X.Shang guan Z.Effects nitrogenfertilization leafphotosynthesis differentdrought—resistance winter wheat varieties[J1.Chinese Journal AppliedEcology,2006。17(11):2064—2059. Zeeman SC,Smith SM.Smith AM.The diurnal metabolism leafstarch rJ].Biochem J。2007。401(1):13—28. 李景原,王太霞,刘贺君,等.库拉索芦荟和木立芦荟叶的形态结构及有效成分含量的比较LJj.河南师范大学学报;自然科学版。2008 (4):120—123. 万方数据 166 河南师范大学学报(自然科学tg) 2010.董 [51 [63 袁小玲,熊格生,邓茳明,等.三个不同耐高温棉花基因型主茎叶的生理生化特征[J].棉花学报,2009(6):62-66.Duan HY,Ding XS。SOIlg JY,et a1.Effects Arabidopsisthaliana seedling,cotyledon leaf[J].PakJBot,2009,41(4):161l一1618. 刘新虎,赵小亮,万传星,等.棉花根系分泌物对棉苗生长及生理活性的影响口].棉花学报,2009(4):81-83. Gritz L.Davies J.Plasmid-eneoded hygromycin Bresistance:the sequence hygromycinBphosphotransferase gene itsexpression Escherichiacoli Saccharomycescerevisiae[J].Gene,1983,25(2-3):179—188. Santerre RF,Allen NE,Hobbs JN,et a1.Expression prokaryoticgenes hygromycinBand G418 resistance dominant-selectionmarkers mouseLcells[J].Oene,1984,30(1/3):147-156. Influence LeafFormation Arabidopsisthaliana Seedling DING Xiao-sheng,DUAN Hong—ying,DUAN Zhi—kun,WANG Shao—peng (College LifeSciences,Henan Normal University,Xinmang 453007,China) Abstract:In Arabidopsisthaliana seedling cotyledon evidentlyaf— fected verysmall itsleaf culturetime increasing,cells meristematiczone shoottip exhibit abnormal array evenatro— phy.Thereby,it Hygromycinmight influence growth leaf,andaccordingly affected growth Arabidopsisthaliana seedling. Key words:Arabidopsis thaliana;hygromycin;leaf)shoot tip [12] [13] [14] [15] [16] (上接第154页) Hugenhohz P,Pitulle C,Hershberger KL,et a1.Novel division level bacterial diversity aYellowstonehot spring[J].J Bacteriol, 1998.180(6):366—376. Sullivan LA,Weightman AJ,Fry JC.New degenerate Cytophaga-Flexibacter-Bacteroides-specific 16S ribosomal DNA-targeted oligo— nucleotide probes reveal high bacterial diversity riverTaft epilithon[J].Appl Environ Microbiol,2002 68(12)201—210. Suzuki Y.Molecular phylogenetie isotopicevidence twolineages chemoautotrophieendosymbionts distinct subdivisionlevel harbored onehost-animal type:The genus Alviniconcha(Gastropoda:Provannidae)[J].FEMS Mierobiol Lett,2005,249(1)l 105一117. 胡尚勤,王汉臣,刘天贵.高产杆菌肽菌株的筛选及培养条件研究[J].河南师范大学学报:自然科学版,2008,36(1)z118—121. Qu JH.The growth Bacillussp.and Microcystis aeruginosa resourcesEJ].JZhanjiang Ocean Univ,2002,22 (3):13—18. Bacterial Diversity AquacultureEnvironment Using PCR DGGE YUAN Ya—weil h,FU Lian-ying孙,LIU Guo—shen91,ZHENG Tian-lin92t26 (1.College LifeSciences,Henan Normal University,Xinxian9453007,China;2.a.Key Laboratory WetlandEcosystems,School LifeSciences,b.State Key Laboratory MarineEnvironmental Sciences, College MarineSciences&Environmental Sciences,Xiamen University。Xiamen 361005,China) Abstract:Biodiversity sedimentfrom anew oldshrimp crabmixed—cultured pond DGGE.Phylogeneticanalysis shows bacteriaIcommunity composition sedimenthas ahigh diversity.The clones from DGGE profile fall sevenbacteria groups,including 7-proteobacteria(30.77%),Firmicutes (15.38%),毋-proteobacteria(7.6%),Bacteroidetes(7.6%),Chloroflexi(7.6%),Actinobacteria(7.6 0A).In addition,a part Unknownenvironmental samples(23.08%)is detected. Key words:marine culture)sediments)PCR-DGGE)bacteriaI diversity 万方数据

(编辑:admin)
http://skyjonez.com/ninanjieshu/8/