28℃振荡10h

作者:admin 来源:未知 点击数: 发布时间:2019年11月22日

  3)把lml农杆菌加入到含有Kan和Rif抗生素的LB培养基中,28℃振荡10h。

  2)LB培养基中添加50mg/L的卡那霉素(Kan)和100mg/L的利福平(Rif)。

  当前拟南芥转基因所使用的方法主要是农杆菌介导的转化(载体法),区别主要是转化的方法不同,有抽真空,花序浸染和喷雾法使用最为广泛。

  1.种子筛选,将收到的种子种植于含有筛选剂(卡那霉素/潮霉素等)的培养基上,筛选出抗性幼苗。

  2.PCR,提取拟南芥基因组,进行PCR扩增,核酸电泳观察有无目的基因。

  拟南芥是一种模式植物,多年来围绕拟南芥的相关研究很多,尤其是对于拟南芥转基因研究非常热门,相关的论文也有很多。原因主要有以下几个方面:

  4 方法简单,不同于传统的植物转基因,不需要植物组织培养阶段,对于实验操作的要求不是很高。

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  4)拟南芥转基因浸润液采用的是1/2MS,加蔗糖50g/L, PH值调至5.7。然后在15p压力下蒸汽灭菌15min,灭菌结束,冷却后保存于4℃,以待转基因使用。

  其中抽真空法转化效率最高,但是步骤麻烦,而且要将拟南芥倒置浸染到菌液中,操作不方便。喷雾法相比来说简便易行,而且进行重复浸染,可以提高转化效率。

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